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细胞检测类服务
 
支原体检测 DNA-Fingerprinting检测 同工酶检测 细胞活力检测
内毒素检测 核型分析 畸胎瘤检测  
 

支原体检测

  支原体是实验室中常见的污染细胞的原核生物(Table 1)。其环状双链DNA中富含腺嘌呤和胸腺嘧啶,细胞质中含有16S和23S核糖体RNA。因支原体属于直径介于0.2-2µm的最小原核生物,形态易变,故极易通过滤膜而逃过培养液的过滤除菌步骤。又因其缺少细胞壁,所以对某些常用抗生素具有抗性。在细胞培养液中,支原体可达到107-108CFU/mL(CFU=Colony Forming Unit,是一种支原体的浓度测量单位)而不使培养液混浊及影响细胞生长。多种支原体对细胞不产生任何病变效应,使得细胞污染不易被察觉。


  支原体会改变宿主细胞的结构和功能等一系列特征,造成实验结果不准。因此每一株外来细胞在进入实验室之前都应通过支原体检测,并且每个实验室都应对其培养中的细胞进行定期支原体检测。

  可污染细胞的支原体种类较多,主要有Mycoplasma orale, M.hyorhinis, M.arginini和Acholeplasma laidlawii。目前已发现的支原体超过100种,这就是单一的检测方法有时会失败的原因之一。我们建议至少选择2种方法来检测支原体。


DNA-Fingerprinting检测

  用四对引物DXS52、 Apo-B、 MD17S5和D2S44监测人类来源的细胞株在传代过程中变异情况。


同工酶检测

  对INNOVATIVE Chemistry的The Authentikit System进行国产化,主要使用LDH, G6PD, MDH和PEP-B四种酶,检测细胞培养过程中的种间污染。

细胞活力检测

  用Nexcelom公司的Cellometer mini型细胞计数及分析系统,通过台盼蓝染色检测冻存细胞及培养细胞的浓度及活力。

内毒素检测

  细菌内毒素对培养物的危害:实验证明,细菌内毒素对培养细胞(尤其是ES细胞)的生长及活性具有明显的抑制作用,且该作用具有一定的时间、剂量依赖性。

  细胞培养中内毒素的来源:细胞培养基中的主要天然成份---牛血清包括胎牛血清和新生牛血清是内毒素的潜在来源。我国2000年版《中国生物制品主要原辅料质控标准》中对牛血清提出比较严格的标准要求。包括蛋白质含量,细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素,支持细胞增殖检查等等。对于胚胎干细胞培养,LIF和bFGF是细菌内毒素的另一个潜在来源。

  细胞培养中内毒素的监控:为排除血清、LIF和bFGF中内毒素的污染,细菌内毒素检测是非常重要的。本平台只使用细菌内毒素小于1EU/ml的血清、LIF和bFGF。本平台对购进的每一批血清、LIF和bFGF都要进行内毒素检测,并向所内外科研单位提供经检测的LIF和bFGF。同时我们也为所内外科研单位提供内毒素检测服务。

核型分析(限小鼠ES细胞)

  服务内容:
  1. 使用客户提供的细胞制备滴片
  2. 染色:Giemsa染色
  3. 实验结果显微照相
  4. 染色体计数并统计实验结果

  需要客户提供的物品:
  1. 细胞
  要求:单核细胞
  细胞状态良好,分裂旺盛
  细胞量:2×106~4×106 cells
  2. 完全培养基

  终产品:
  1. 每株细胞,提供20张100倍显微照片。
  2. 染色体计数并统计实验结果。
  3. 如需提供原玻璃片,请在技术服务登记表内注明。

畸胎瘤检测

  服务内容:
  1. 对免疫缺陷小鼠进行细胞注射
  2. 取畸胎瘤,制备切片及H&E染色

  样品要求:
  1. 细胞,浓度为2X10^6 /mL,用30% matrigel重悬
  2. 细胞培养液1mL(用作支原体检测)

  终产品:
  代表三胚层来源组织的显微照片;染色后的切片



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